Site icon Фармакопея.рф

ОФС.1.7.1.0006.15 Лактосодержащие пробиотики

ОФС.1.7.1.0006.15 Лактосодержащие пробиотики

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на группу иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП) – пробиотики, содержащие лактобактерии (далее по тексту «лактосодержащие пробиотики»).

Лактосодержащие пробиотики представляют собой биомассу живых бактерий рода Lactobacillus, лиофильно высушенную в защитной среде (сахарозо-желатиновой, сахарозо-желатино-молочной или иной).

Лактосодержащие пробиотики по составу подразделяются на:

Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus

Штаммы бактерий рода Lactobacillus, используемые для производства лактосодержащих пробиотиков, депонируют в официальных коллекциях (табл. 1).

Таблица 1– Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus, используемые в производстве лактосодержащих пробиотиков в РФ

Название производственного штамма бактерий рода Lactobacillus Место депонирования,

коллекционный номер штамма-депозита

L.acidophilus 100аш Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-3190
 Lacidophilus К3Ш24 Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-3090
Lacidophilus NK1 Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-8957 (В центральной лаборатории ВНИМИ № 22/10)
Lacidophilus NK2 Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-8958
L.acidophilus NK5 Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-8959
Lacidophilus NK12 Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ № В-8960
L.plantarum 8Р-А3 Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), № 900811
Lfermentum 90Т-С4 Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), № 900812
Lplantarum 7-19 (38) Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), №790038
L.fermentum 1-20 (39) Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), №790039

Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus проверяют по культуральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим свойствам (табл. 2 и 3), безопасности (in vitro и in vivo) (табл. 4).  Определение проводят в соответствии с ОФС «Производственные пробиотические штаммы и штаммы для контроля пробиотиков» и ОФС «Безопасность пробиотиков in vivo».

Штаммы ацидофильных лактобацилл среднеустойчивы к колистину, триметоприму, азтреонаму, канамицину, суфадиазину, норфлоксацину. Они чувствительны к антибиотикам группы цефалоспоринов.

Таблица 2–Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus

Название штамма Описание морфологических и культуральных свойств
L.acidophilus 100аш

L.acidophilus К3Ш24

Факультативные анаэробы, микроаэрофилы растут в присутствии азота и углекислого газа в атмосфере. Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2 – 4 и более клеток. Штаммы, применяемые для изготовления препарата, могут находиться в S  и R-форме. Размер клеток 18-часовой культуры, выращенной в молоке, составляет 10–20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются метиленовой синью.

При выращивании на агаре с гидролизованным молоком через 48–72 ч роста штаммы образуют «локонообразные» колонии на поверхности агара и колонии в виде «паучков» в глубине агара. Диаметр колоний – 1–2 мм.

Штаммы обладают высокой активностью свертывания молока. При оптимальной для роста температуре и внесении 3–5% посевного материала должны свертывать молоко за 1–12 ч, снижая рН молока до уровня 3,8 – 4,2.

L.acidophilus NK1

Lacidophilus NK2

L.acidophilus NK5

L.acidophilus NK12

Факультативные анаэробы, микроаэрофилы; растут в присутствии азота и углекислого газа в атмосфере. Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2–4 и более клеток или поодиночке. Штаммы, применяемые для изготовления препарата, могут находиться в S- и R-форме. Величина клеток 18-часовой культуры в молоке составляет 10–20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются по Граму. При выращивании на агаре с гидролизованным молоком через 48–72 ч роста штаммы образуют «локонообразные» колонии на поверхности агара и колонии в виде «паучков» в глубине агара. Диаметр колоний – 1–2 мм.

При культивировании на среде МРС-5 в анаэробных или микроаэрофильных условиях через 48–72 ч штаммы образуют круглые без четких границ колонии.

L.plantarum 8Р-А3

L.plantarum 7-19

Факультативные анаэробы, растут в атмосфере углекислого газа и азота, а также в присутствии кислорода. На жидкой среде МРС-1 вырастают в виде равномерной мути и гомогенного белого осадка на дне пробирки; на полужидкой среде МРС-2 образуют изолированные колонии в виде тяжей. На плотной среде МРС-4 образуют выпуклые, непрозрачные, белые колонии
L.fermentum 90Т-С4 Lfermentum 1-20 Факультативные анаэробы, растут в атмосфере углекислого газа и азота, а также в присутствии кислорода. На жидкой среде МРС-1 дают равномерное помутнение и образуют гомогенный белый осадок на дне пробирки; на полужидкой среде МРС-2 образуют изолированные колонии в виде тяжей. На плотной среде МРС-4 образуют слабовыпуклые, полупрозрачные, сероватые колонии

Таблица 3 – Физиолого-биохимические свойства производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus

 

Свойства

Штаммы бактерий рода Lactobacillus
L.acidophilus

100аш, К3Ш24

L.acidophilus NK1, NK2 NK5, NK12 L. plantarum

8Р-А3,

7-19

L.fermentum 90Т-С4,

1-20

Ферментация:        
— глюкоза + + + +
— лактоза + + + +
— галактоза + + + +
— манноза + + + +
— декстроза + + + +
— фруктоза + + + +
— мальтоза + + + +
— сахароза + + + +
— целлобиоза + + + в
— салицин + + +
— маннит +
— рамноза
— ксилоза в в
— сорбит +
— арабиноза в в
— эскулин + + +
— меллибиоза + в + +
— трегалоза в в + в
— мелецитоза в
Образование газа из глюкозы +.
Образование кислоты

из глюкозы

+ + + +
Каталаза
Лизоцимная активность ± ± +
Оптимальная температура

роста, оС

(38±1) (38±1) (37±1) (37±1)
Рост при температуре 61 оС + + ± ±
Рост при температуре 20 оС + + + +
Рост при температуре 15 оС +
Сквашивание молока +

L(+)-DL- молочная кислота

+

L(+)-DL- молочная кислота

+ +
Рост в щелочной среде (рН=8) + + ± ±
Рост в присутствии 0,4–0,6 % растворе фенола + + ± ±
Рост в присутствии

солей желчи (до 20 %)

+ + ± ±
Рост в 2% растворе NaCl + + ± ±
Адгезивная активность + +
Активность

кислотообразования, оТ

не ниже

230

не ниже

230

не ниже

230

не ниже

230

Антагонистическая активность (зоны задержки роста тест-штаммов, мм) не менее

20

не менее

20

не менее

20

не менее

20

Примечание: «+» положительный тест: «-» отрицательный тест

Таблица 4 – Изучение безопасности штаммов бактерий рода Lactobacillus

Название

микроорганизма (род, штамм)

Безвредность Вирулентность Токсичность Токсигенность
Вводи-мая доза,

х1010 КОЕ/ 0,5мл

Кол-во живых/ павших мышей Вводи-мая доза,

х109 КОЕ/ 0,5мл

Кол-во живых/ павших мышей Вводи-мая доза, х109 КОЕ/мл Кол-во живых/ павших мышей Вводи-мая доза,

мл

Кол-во живых/ павших мышей
L. acidophilus 100аш

К3Ш24

NK1

NK2

NK5

NK12

1 10/0 1 10/0 1 10/0 0,5 10/0
5 10/0 5 10/0 5 10/0 1,0 10/0
10 10/0 10 10/0 10 10/0
L. plantarum

8Р-А3,7-19 (38)

1 10/0 1 10/0 1 10/0 0,5 10/0
5 10/0 5 10/0 5 10/0
10 10/0 10 10/0 10 10/0 1,0 10/0
L.fermentum

90Т-С4, 1-20 (39)

1 10/0 1 10/0 1 10/0 0,5 10/0
5 10/0 5 10/0 5 10/0
10 10/0 10 10/0 10 10/0 1,0 10/0

ПРОИЗВОДСТВО

Производство лактосодержащих пробиотиков основано на выращивании/культивировании производственного штамма или штаммов бактерий рода Lactobacillus на оптимальной питательной среде в адекватных условиях методом глубинного культивирования с последующей лиофилизацией биомассы в защитной среде.

При производстве лактосодержащих пробиотиков проводят валидацию технологического процесса и методов контроля, которые в соответствии с требованиями правил организации производства и контроля качества лекарственных средств доказывают, что конкретная методика, процесс, оборудование, исходное сырье, деятельность персонала или система действительно приводят к ожидаемым результатам и гарантируют, что лекарственное средство соответствует своему составу, не содержит контаминантов, маркировано надлежащим образом, упаковано и сохраняет свои свойства в течение всего срока годности.

При производстве лактосодержащих пробиотиков особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества для оценки их воспроизводимости и анализа качества готовой продукции при выпуске и в течение всего срока хранения.

Лактосодержащие пробиотики для медицинского применения выпускают в следующих лекарственных формах: лиофилизаты (флаконы), порошки, таблетки, капсулы (пероральные, вагинальные, капсула в капсуле), суппозитории и мази. Показатели качества лекарственного средства оценивают в соответствии с лекарственной формой.

ИСПЫТАНИЯ

Показатели качества лекарственного средства лекарственных форм лиофилизаты, таблетки и капсулы, порошки, суппозитории и мази оценивают в соответствии с требованиями ОФС «Таблетки» и «Капсулы», «Порошки», «Суппозитории» и «Мази».

Описание

Приводится описание внешнего вида соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность

Подлинность подтверждают следующими методами – микроскопическим (окраской мазков по Граму), бактериологическим (описание вида колоний, выросших на адекватных питательных средах, и подтверждается специфической активностью). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Производственные пробиотические штаммы и штаммы для контроля пробиотиков», если в нормативной документации не указаны другие требования.

Время восстановления препарата

(для лиофилизатов и порошков). Испытание проводят в соответствии сОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты» либо по методике, описанной в нормативной документации, с указанием времени получения восстановленного препарата  (для лиофилизатов – не более 5 мин, для порошков – не более 20 мин, если в нормативной документации нет других указаний).

Время распадаемости

(для таблеток и капсул). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость таблеток и капсул».

Указывают применяемый растворитель (среда распадаемости), его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание, использование водяной бани).

Время  распадаемости для  таблеток не должно превышать 15 мин, для капсул – 20 мин, если в нормативной документации не указаны другие требования.

Температура плавления или время полной деформации

(для суппозиториев и мазей). Для суппозиториев, изготовленных на липофильной основе, определяют температуру плавления в соответствии с ОФС «Суппозитории», «Мази» и «Температура плавления» (метод 2), которая не должна превышать температуру 37 0С, если нет других указаний в нормативной документации. Если определение температуры плавления затруднительно, то определяют время полной деформации.

Для суппозиториев на липофильной основе определяют время полной деформации в соответствии с ОФС «Определение времени полной деформации суппозиториев на липофильной основе». Время полной деформации не должно превышать 20 мин, если нет других указаний в нормативной документации.

рН

(для лиофилизатов, порошков, капсул, таблеток). Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Указывается допустимый интервал значений рН; в случае определения рН после растворения следует указать растворитель и его объем.

Потеря в массе при высушивании

(для лиофилизатов, капсул, таблеток). Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или другим валидированным методом.

Показатель потери в массе при высушивании должен составлять (если нет других указаний в нормативной документации) для:

Средняя масса и отклонения от средней массы

(для порошков, таблеток, содержимого капсул, суппозиториев и мазей). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС «Однородность массы дозированных лекарственных форм».

Специфическая безвредность

Определение проводят в соответствии с ОФС «Безопасность пробиотиков в тестах in vivo». Указываются требования и критерии специфической безвредности; требования к животным, используемым для контроля (порода/линия, пол), их количество, групповая масса животных перед введением препарата и после окончания срока наблюдения; дозы, условия разведения и методы введения лекарственного средства; продолжительность наблюдения и учитываемые показатели. Лекарственное средство должно быть безвредным.

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов (микробиологическая чистота)

Определение возможной контаминации испытуемого препарата проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота» методом прямого посева. Лактосодержащие пробиотики должны соответствовать нормативным требованиям, изложенным в ОФС «Микробиологическая чистота» (если в нормативной документации не приведены другие требования):

* Дополнительно для лекарственной формы мази: в единице препарата (г) должны отсутствовать представители рода Bacillus.

В нормативных документах на пробиотики для детей введены более строгие нормы, а именно:

Указывают используемые питательные среды, количество и объем испытуемого материала, условия инкубации и ее продолжительность, особенности учета результатов.

Специфическая активность

Специфическая активность определяется количеством жизнеспособных бактерий в 1 дозе лекарственного средства и активностью кислотообразования (или антагонистической активностью) в соответствии с ОФС «Определение специфической активности пробиотиков».

В 1 дозе (таблетке, капсуле и т.д.) препарата должно содержаться:

Активность кислотообразования штамма-продуцента, входящего в испытуемый препарат, должна быть не менее 220оТ (если нет других указаний в нормативной документации).

Производственные штаммы и штаммы для контроля

Определение проводят в соответствии с ОФС «Производственные пробиотические штаммы и штаммы для контроля пробиотиков».

В разделе должна содержаться информация:

  1. Наименование производственных штаммов и штаммов для контроля, обоснование для включения в производство (депонирование в официальных коллекциях).
  2. Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть проверены на отсутствие контаминации и соответствующим образом охарактеризованы по биологическим и биохимическим свойствам.

Контроль качества производственных пробиотических штаммов и штаммов для контроля пробиотиков рекомендуется проводить не реже 1 раза в год, если в нормативной документации нет других указаний.

Упаковка и маркировка

В соответствии сОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование и хранение

При температуре от 2 до 8 оС, если нет других указаний в нормативной документации. Указывают условия транспортирования и хранения, обеспечивающие стабильность лекарственного средства.

Скачать в PDF ОФС.1.7.1.0006.15 Лактосодержащие пробиотики

Exit mobile version