Содержание
ОФС.1.5.3.0011.15 Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
Вводится впервые
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Содержание остаточных пестицидов, как правило, определяют в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, получаемых от культивируемых лекарственных растений.Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырьё и лекарственные растительные препараты, независимо от формы выпуска, на этапах переработки лекарственного растительного сырья, при производстве лекарственных растительных препаратов, хранении, транспортировании, закупке, ввозе в страну, сертификации и реализации (далее обращение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов).
Термины и определения
В настоящей общей фармакопейной статье использованы следующие определения.
Пестициды – химические или биологические препараты, используемые для борьбы с вредителями и болезнями растений, сорными растениями, вредителями хранящейся сельскохозяйственной продукции, бытовыми вредителями и внешними паразитами животных, а также для регулирования роста растений, предуборочного удаления листьев (дефолианты), предуборочного подсушивания растений (десиканты).
Остаточные пестициды – вещества, включающие в себя остаточное количество пестицидов и любые производные пестицидов (продукты конверсий, реакций, метаболиты, примеси).
Проба для определения остаточных пестицидов и тяжелых металлов – определенное количество пробы, выделенной методом квартования из объединенной пробы.
Единицы измерения – мг/кг – количество мг пестицида в 1 кг лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата.
Средства измерений включают необходимые для определения содержания пестицидов приборы и методики выполнения измерений, имеющие нормированные метрологические характеристики.
Контроль на содержание остаточных количеств пестицидов – определение соответствия исследуемых объектов требованиям нормативной документации.
Общие положения
Для обеспечения достоверности полученных результатов анализируемое на содержание остаточных пестицидов лекарственное растительное сырье/препараты, как правило, должно иметь влажность не более 15 %.
В лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах определяют содержание остаточных пестицидов, в том числе хлорсодержащих: гексахлорциклогексана (ГХЦГ) и его изомеров (α-, β-, γ-ГХЦГ), дихлордифенилтрихлорметилметана (ДДТ) и его метаболитов (ДДД – дихлордифенилдихлорметилметана, ДДЕ – дихлордифенил-хлорэтилена), гексахлрбензол (ГХБ), алдрина, гептахлора и других.
Основные этапы определения содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах:
- отбор пробы для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка (ОФС «Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов»);
- подготовка пробы к определению;
- определение содержания остаточных пестицидов в испытуемых образцах;
- обработка результатов измерений;
- определение соответствия сырья допустимым нормам.
Пробы должны анализироваться немедленно, во избежание возможного разрушения остатков пестицидов. Если это невозможно, пробы сохраняют в герметичных контейнерах, пригодных для контакта с пищевыми продуктами, при температуре ниже 0 °С в защищенном от света месте.
Все реактивы и растворители не должны содержать примесей, особенно пестицидов, которые могут влиять на результаты анализа.
Используемые аналитические методы должны удовлетворять требованиям ОФС «Валидация аналитических методик» и следующим критериям:
- выбранный метод является подходящим для комбинации остаточный пестицид/лекарственное растительное сырье;
- при интерпретации результатов необходимо учитывать влияние некоторых компонентов (например, влияние дисульфида у растений семейства Крестоцветных);
- концентрации испытуемого раствора и раствора сравнения, а также настройки аппаратуры должны быть такими, чтобы аналитический сигнал, используемый для количественного анализа пестицидов, находился в пределах линейного диапазона используемого детектора;
- каждый пестицид извлекается в диапазоне 70-110 %;
- повторяемость и воспроизводимость метода: относительное стандартное отклонение (%) не должно превышать значений, указанных в табл. 1.
Для определения содержания пестицидов в пробе используется газовая (ГХ/МС) или жидкостная (ВЭЖХ/МС) хроматография с масс-спектрометрическим детектором. При отсутствии масс-спектрометрического детектора можно использовать электронно-захватный или другие селективные детекторы. Определение проводится в соответствии с требованиями ОФС «Хроматография», «Газовая хроматография», «Высокоэффективная жидкостная хроматография» и «Масс-спектрометрия».
Таблица 1 – Аналитические характеристические параметры в различных диапазонах концентрации вещества
| Диапазон концентрации вещества, мг/кг | Повторяемость
(относительное стандартное отклонение, %) |
Воспроизводимость
(относительное стандартное отклонение, %) |
| 0,001-0,01 | 30 | 60 |
| >0,01-0,1 | 20 | 40 |
| >0,1-1 | 15 | 30 |
| >1 | 10 | 20 |
Лекарственные растительные препараты получают из лекарственного растительного сырья, которое соответствует по содержанию остаточных пестицидов требованиям настоящей общей фармакопейной статьи. Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственных растительных препаратах проводят в случае обоснованных претензий.
Поставщик лекарственного растительного сырья должен предоставить протокол анализа на поставляемую партию лекарственного растительного сырья, в котором указываются использованные пестициды и содержание остаточных пестицидов.
Порядок отбора проб
Отбор проб от партии сырья/серии препарата проводят в соответствии с требованиями ОФС «Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» и настоящей статьей.
Отбор проб для проведения испытаний осуществляют в соответствии с действующими санитарно-гигиеническими правилами и условиями, исключающими дополнительное загрязнение сырья.
Определение остаточных пестицидов (хлорсодержащих)
Подготовка проб к анализу
Пробы лекарственного растительного сырья/препарата измельчают и просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Затем около 5 г сырья/препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 100 мкл стандартного раствора внутреннего стандарта с общей концентрацией 1 мкг/мл и 50 мл перегнанного гексана, перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч при нагревании с использованием обратного холодильника. Затем полученное извлечение отфильтровывают через стекловату и проводят повторную экстракцию 30 мл гексана. Остаток на фильтре промывают 30 мл гексана и промывную жидкость объединяют с полученными извлечениями. К объединенному извлечению добавляют натрия сульфат безводный в соотношении 1:10 и выдерживают 1-1,5 ч, а затем упаривают на роторном вакуумном испарителе до объема 10-15 мл.
В делительную воронку вместимостью 100 мл помещают 10-15 мл полученного объединенного извлечения и прибавляют 20-25 мл серной кислоты концентрированной. Содержимое делительной воронки осторожно встряхивают 5-10 раз и оставляют до расслоения фаз, после чего нижний слой (кислотный) отбрасывают. Очистку повторяют несколько раз до получения бесцветного слоя серной кислоты. Очищенные извлечения нейтрализуют натрия гидрокарбоната раствором 0,5 М и промывают водой очищенной до нейтральной реакции промывных вод, после чего извлечения пропускают через колонку (длиной 10 см и диаметром 1 см), последовательно заполненную алюминия оксидом (высота слоя 3 см) и натрия сульфатом безводным (высота слоя 3 см). Колонку промывают 20 мл метиленхлорида. Полученное очищенное извлечение упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона.
АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ СПОСОБ ПРОБОПОДГОТОВКИ
Для проведения анализа может быть использован альтернативный способ пробоподготовки.
Измельчают около 50 г лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата (проба для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка) и просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Затем помещают 10 г (точная навеска) измельченного образца в тефлоновую пробирку для центрифугирования вместимостью 50 мл, добавляют 10 мл ацетонитрила для хроматографии, тщательно встряхивают в течение 1 мин, добавляют 4 г безводного магния сульфата, 1 г натрия хлорида, тщательно встряхивают в течение 1 мин. Затем экстракт центрифугируют в течение 3 мин при 5000 об/мин. После центрифугирования из пробирки из верхнего слоя переносят аликвоту объемом 6 мл в тефлоновую пробирку для центрифугирования вместимостью 15 мл, содержащую 150 мг сорбента, представляющего собой смесь первичных и вторичных аминов, и 950 мг магния сульфата безводного, и снова центрифугируют в течение 3 мин при 5000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм. 1,5 мл полученного фильтрата переносят в хроматографическую виалу, содержащую 15 мкл муравьиной кислоты раствора 5 % в ацетонитриле (для стабилизации экстракта). Проводят определение содержания остаточных пестицидов методом ГХ/МС или ВЭЖХ/МС.
В качестве внутреннего стандарта может быть использован трифенилфосфат. Его добавляют в начальной стадии пробоподготовки одновременно с ацетонитрилом в концентрации 1 мкг/мл для ВЭЖХ/МС или 10 мкг/мл для ГХ/МС.
Могут быть использованы другие методики пробоподготовки при условии их валидации.
Проведение измерений
Хроматомасс-спектрометрический анализ полученных растворов проводят на газовом хроматографе с масс-селективным детектором с использованием стандартных веществ (стандартный образец состава: α-гексахлорциклогексан, γ-гексахлорциклогексан, ДДТ, ДДЕ, ДДД, альдрин, гептахлор), а также внутреннего стандарта – 4,4΄-дибромдифенила.
Для анализа используют 30 м кварцевую капиллярную колонку НР-5MS (сополимер 5% дифенила и 95% диметилсилоксана) с внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,3 мкм или любую аналогичную. Анализ осуществляют при условиях, указанных в табл. 2.
Масс-спектры регистрируют при ионизации электронным ударом с энергией ионизации 70 эВ. Скорость сканирования должна составлять
1 скан/с при диапазоне сканирования 40-600 а.е.м.
Таблица 2 – Условия хроматомасс-спектрометрического анализа остаточных пестицидов (хлорсодержащих) на колонке НР-5MS
| Тнач., °C | v, °C/мин | Тконеч., °C | Тисп., °C | Тинт., °C | V, мкл |
| 70 | 10 | 300 | 280 | 280 | 1 |
Примечание: Тнач. – начальная температура термостата колонки (выдержка 4 мин.); v – скорость линейного нагрева колонки; Тконеч – конечная температура колонки (выдержка 5 мин.); Тисп – температура испарителя; Тинт. – температура интерфейса; V, мкл – объем вводимой пробы.
Хроматомасс-спектрометрический анализ проводят в режиме селективного детектирования индивидуальных ионов с идентификацией пестицидов по характеристическим ионам и времени удерживания с использованием растворов стандартных образцов (табл. 3).
Таблица 3 – Хроматографические и масс-спектрометрические данные анализа растворов стандартных образцов хлорорганических пестицидов (ХОП) и полихлорбифенилов (ПХБ)
| Наименование
ХОП или ПХБ |
Время удерживания, мин | Характеристические ионы, m/z | Относительное время удерживания |
| α-ГХЦГ
β-ГХЦГ γ-ГХЦГ |
17,26
17,82 17,96 |
219, 183, 217, 181 | 0,848
0,874 0,881 |
| ДДТ
ДДД |
23,49
22,80 |
235, 237, 165 | 1,152
1,118 |
| ДДЕ | 22,02 | 318, 246, 248 | 1,080 |
| Альдрин | 20,14 | 263, 298, 66 | 0,988 |
| Гептахлор | 19,45 | 272, 274, 339, 237 | 0,954 |
| 4,4΄-Дибром-дифенил | 20,39 | 312, 310, 314, 152 | 1,000 |
Примечание: Данные представлены для колонки НР-5MS.
Критериями идентификации являются:
- времена удерживания, которые не должны отличаться более чем на 0,5 мин от времени удерживания стандартного вещества;
- относительные интенсивности пиков характеристических ионов на реконструированной хроматограмме не должны отличаться более чем на 20% от относительной интенсивности этих пиков в масс-спектре стандартного вещества, полученного на данной хроматомасс-спектрометрической системе;
- синхронность максимумов пиков характеристических ионов;
- соотношение сигнал/шум, которое должно быть не менее 3:1.
Условия проведения измерений могут быть иными при использовании других детекторов, при этом методика должна быть валидирована.
Обработка результатов измерений
Содержание пестицидов в лекарственном растительном сырье/препарате рассчитывают методом внешнего стандарта, в качестве которого используют растворы стандартных веществ определяемых соединений. Для количественной оценки используют пробы, извлечение из которых внутренних стандартов составляет 70-110 %. Рассчитывают среднее значение из трех измерений площадей пиков анализируемых веществ.
Количество определяемого компонента (Сисп) в нг/г или нг/мл вычисляют по формуле:
,
где
Сконтр – концентрация определяемого соединения в контрольной пробе, нг/г или нг/мл;
S – площадь пика определяемого соединения на хроматограмме испытуемого раствора;
Сcт – концентрация определяемого соединения в стандартном растворе;
Scт – площадь пика определяемого соединения на хроматограмме стандартного раствора;
P(V) – навеска в г или объем пробы в мл.
Для перевода концентрации в мг/кг полученное значение следует разделить на 1000.
Определение соответствия остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах допустимым нормам
Пределы допустимого содержания остаточных хлорсодержащих пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах не должны превышать значения, указанные в табл. 4.
Таблица 4 – Пределы допустимого содержания остаточных пестицидов (хлорсодержащих) в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
| Вещество | Пределы допустимого содержания, мг/кг |
| Гексахлорциклогексан и его изомеры (в сумме)
ДДТ и его метаболиты (в сумме) Алдрин Гептахлор |
0,1
0,1 Не допускается Не допускается |
Если нет других указаний в фармакопейной статье, количество других остаточных пестицидов не должно превышать значений предельно допустимого содержания, указанных в табл. 5.
Таблица 5 – Пределы допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
| N п/п | Вещество | Пределы допустимого содержания, мг/кг |
| 1 | Азинфос-метил | 1,0 |
| 2 | Азинфос-этил | 0,1 |
| 3 | Алахлор | 0,02 |
| 4 | Ацефат | 0.1 |
| 5 | Бромид, неорганический (в пересчете на бромид ион) | 50 |
| 6 | Бромофос-метил | 0.05 |
| 7 | Бромофос-этил | 0,05 |
| 8 | Бромпропилат | 3,0 |
| 9 | Винклозолин | 0,4 |
| 10 | Гексахлорбензол | 0,1 |
| 11 | Дельтаметрин | 0,5 |
| 12 | Диазинон | 0,5 |
| 13 | Дихлофлуанид | 0,1 |
| 14 | Дихлорфос | 1,0 |
| 15 | Дикофол | 0,5 |
| 16 | Диметоат и ометоат (в сумме) | 0,1 |
| 17 | Дитиокарбаматы (в пересчете на CS2) | 2,0 |
| 18 | Квиналфос | 0,05 |
| 19 | Квинтоцен (в сумме с пентахлоранилином и метилпентахлорфенилсульфидом) | 1,0 |
| 20 | Малатион (в сумме с малаоксоном) | 1,0 |
| 21 | Мекарбам | 0,05 |
| 22 | Метакрифос | 0,05 |
| 23 | Метамидофос | 0,05 |
| 24 | Метидатион | 0,2 |
| 25 | Метоксихлор | 0,05 |
| 26 | Мирекс | 0,01 |
| 27 | Монокротофос | 0,1 |
| 28 | Паратион-метил и параоксон-метил (в сумме) | 0,2 |
| 29 | Паратион-этил и параоксон-этил (в сумме) | 0,5 |
| 30 | Пендиметалин | 0,1 |
| 31 | Пентахлоранизол | 0,01 |
| 32 | Перметрин и изомеры (в сумме) | 1,0 |
| 33 | Пиперонилбутоксид | 3.0 |
| 34 | Пиретрум (цинерин I, цинерин II, джасмолин I, джасмолин II, пиретрин I и пиретрин II в сумме) | 3,0 |
| 35 | Пиримифос-метил и с N-дезэтил-
пиримифос-метил в сумме |
4,0 |
| 36 | Пиримифос-этил | 0,05 |
| 37 | Протиофос | 0,05 |
| 38 | Профенофос | 0,1 |
| 39 | Процимидон | 0,1 |
| 40 | С-421 | 0,02 |
| 41 | Текназен | 0,05 |
| N п/п | Вещество | Пределы допустимого содержания, мг/кг |
| 42 | Тетрадифон | 0,3 |
| 43 | Фенвалерат | 1,5 |
| 44 | Фенитротион | 0,5 |
| 45 | Фенпропатрин | 0,03 |
| 46 | Фенсульфотион (в сумме) | 0,05 |
| 47 | Фентион (в сумме) | 0,05 |
| 48 | Фенхлорофос (сумма фенхлорофоса и фенхлорофосоксона) | 0,1 |
| 49 | τ-Флувалинат | 0,05 |
| 50 | Флуцитринат | 0,05 |
| 51 | Фонофос | 0,05 |
| 52 | Фозалон | 0,1 |
| 53 | Фосмет | 0,05 |
| 54 | Хлордан (сумма цис-, транс- и оксихлордана) | 0,05 |
| 55 | Хлорпирифос-метил | 0,1 |
| 56 | Хлорпирифос-этил | 0,2 |
| 57 | Хлортал-диметил | 0,01 |
| 58 | Хлорфенвинфос | 0,5 |
| 59 | λ-Цигалотрин | 1,0 |
| 60 | Циперметрин и изомеры (в сумме) | 1,0 |
| 61 | Цифлутрин (в сумме) | 0,1 |
| 62 | Эндосульфан (изомеры и эндосульфана сульфат в сумме) | 3,0 |
| 63 | Эндрин | 0,05 |
| 64 | Этион | 2,0 |
| 65 | Этримфос | 0,05 |
Значение пределов допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах (ПДСОПЛРС), не включенных в табл. 5, рассчитывают по формуле c учетом значения уровня допустимого суточного потребления вещества, рекомендованного ФАО/ВОЗ, и величины дозы суточного потребления лекарственного растительного сырья/препарата:
| ПДСОПЛРС =ДСП · М/МСД · 100 | |
где ДСП – допустимое суточное потребление вещества* в мг на кг массы тела;
М – масса тела, кг (60 кг);
МСД – суточная доза лекарственного растительного сырья, кг;
100 – фактор потребления**.
Значение предельно допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном препарате (ПДСОПЛРП) рассчитывают по формуле:
1) Э ≤ 10
ПДСОПЛРП = ПДСОП ЛРС · Э,
2) Э > 10
| ПДСОПЛРП =ДСП · М · Э/МСДП · 100 | |
где
ДСП – допустимое суточное потребление вещества* в мг на кг массы тела;
М – масса тела в кг (60 кг);
100 – фактор потребления**;
Э – фактор экстракции определяется экспериментально, как соотношение между количеством сырья и количеством полученного препарата;
МСДП – суточная доза лекарственного растительного препарата в кг.
Примечания:
* – как опубликовано Организацией по продовольствию и сельскому хозяйству ВОЗ;
** – относится к требованию ВОЗ о том, что количество остаточных пестицидов, потребляемых из ЛРС, не должно превышать 1% от общего количества потребляемых пестицидов.
Если в ходе анализа установлено превышение допустимых норм остаточных пестицидов, организация, проводившая анализ, должна поставить в известность производителя готовой продукции и оптовое или розничное предприятие, через которое данное лекарственное растительное сырье или лекарственный растительный препарат поступил на реализацию.