Глава 6. Спецификации. Методы испытания и критерии приемлемости биотехнологических (биологических) препаратов

Содержимое (Table of Contents)

Глава 6. Спецификации. Методы испытания и критерии приемлемости биотехнологических (биологических) препаратов

 

1. Введение

 

1.1. Цель

 
В настоящей главе представлены общие принципы формирования и обоснования единого свода спецификаций на биотехнологические и биологические препараты, представляемых в составе регистрационного досье для регистрации лекарственных препаратов.
 

1.2. Вводная часть

 
Под спецификацией понимается перечень испытаний, ссылок на аналитические методики и соответствующие критерии приемлемости, представляющие собой численные (количественные) пределы, диапазоны и прочие критерии для описанных испытаний. Спецификация задает набор критериев, которым должны соответствовать активная фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства, чтобы считаться приемлемыми для использования по целевому назначению. Спецификации составляются на все исходные материалы, сырье, промежуточные продукты, вспомогательные вещества, активную фармацевтическую субстанцию, лекарственный препарат. Для лекарственного препарата спецификация является частью нормативного документа по качеству. Под «соответствием спецификациям» понимается, что при испытании согласно представленным в спецификации аналитическим методикам активная фармацевтическая субстанция и лекарственный препарат будут отвечать заданным в спецификациях критериям приемлемости. Спецификации являются критическими стандартами качества, которые составляются и обосновываются производителем, после чего утверждаются уполномоченными органами государств-членов в качестве условий регистрации.
Спецификации являются частью общей стратегии контроля, разработанной для обеспечения качества лекарственных препаратов и постоянства характеристик лекарственных препаратов. Другие элементы данной стратегии включают:
  • подробное установление в процессе разработки характеристик (описание свойств), на основании которых составляются спецификации;
  • соответствие правилам надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией;
  • валидацию процесса производства;
  • испытание сырья и внутрипроизводственные испытания;
  • изучение стабильности и т.д.
Спецификации предназначены в большей мере для подтверждения качества активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, чем для составления их полной характеристики с фармацевтической точки зрения, и должны описывать молекулярные и биологические свойства, контроль которых может быть использован для подтверждения безопасности и эффективности лекарственного препарата.
 

1.3. Сфера применения

 
Требования, изложенные в настоящей главе, применимы к лекарственным препаратам, которые являются белками и полипептидами, их производными, а также к лекарственным препаратам, компонентами которых они являются (например, конъюгатам). Такие белки и полипептиды продуцируются экспрессирующими системами рекомбинантных и нерекомбинантных клеточных культур и могут быть в надлежащей степени очищены и охарактеризованы с использованием подходящего набора аналитических методик.
Требования настоящей главы, можно также применять к другим лекарственным препаратам, например, белкам и полипептидам, изолированным из тканей и жидкостей организма. Для определения применимости настоящей главы в отношении таких лекарственных препаратов производители должны проконсультироваться с уполномоченными органами государств-членов. Если в других главах настоящих Правил указана ссылка на настоящую главу, то на такие лекарственные препараты распространяются требования, приведенные в настоящей главе, либо эти требования следует учитывать.
Требования настоящей главы не распространяются на антибиотики, синтетические пептиды и полипептиды, гепарины, витамины, клеточные метаболиты, препараты ДНК, экстракты аллергенов, традиционные вакцины, клетки, цельную кровь и клеточные компоненты крови.
В настоящей главе не приводятся требования к отдельным аналитическим методикам и частным критериям приемлемости. Кроме того, требования настоящей главы не предназначены для применения к спецификациям продуктов, проходящих стадии доклинического и (или) клинического исследования, однако приведенные в ней указания следует принимать во внимание для этих продуктов.
 

2. Принципы составления спецификаций

 

2.1. Установление характеристик (описание свойств)

 
Для составления надлежащих спецификаций необходимо с помощью надлежащих методов охарактеризовать свойства биологического или биотехнологического средства, включающие определение физико-химических свойств, биологической активности, иммунохимических свойств, чистоты и примесей. Критерии приемлемости следует устанавливать и обосновывать результатами анализа серий, использованных в доклинических и (или) клинических исследованиях, результатами анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства, результатами исследований стабильности и соответствующих данных по разработке.
Подробное установление характеристик выполняется на стадии разработки и, при необходимости, после внесения в процесс производства значительных изменений. На момент подачи документов на регистрацию препарат необходимо сравнить с соответствующим стандартным образцом (при наличии). По возможности (и если это применимо) препарат следует сравнить с его естественным аналогом. Кроме того, на момент подачи заявления о регистрации производитель должен располагать должным образом охарактеризованными собственными стандартными материалами, которые будут использоваться в ходе биологических и физико-химических испытаний промышленных серий. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что постоянно разрабатываются новые аналитические технологии и модификации уже существующих технологий, которые необходимо применять при возникновении необходимости.
 

2.1.1. Физико-химические свойства

Программа установления физико-химических свойств обычно включает определение состава, физических свойств и первичной структуры целевого (требуемого) продукта. В некоторых случаях с помощью соответствующих физико-химических методов можно получить данные о структурах более высокого порядка, правильность которых обычно подтверждается наличием биологической активности.
Поскольку продукция белков живыми организмами осуществляется с помощью процессов биосинтеза, таким белкам присуща определенная степень структурной гетерогенности, поэтому желаемый продукт может представлять собой смесь ожидаемых посттрансляционно модифицированных форм (например, гликоформ). Такие формы могут обладать активностью и не оказывать негативного влияния на безопасность и эффективность препарата (как это указано в подразделе 2.1.4 настоящей главы). Производитель должен установить профиль гетерогенности желаемого продукта и подтвердить его постоянство, путем испытания серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях. Если установлен постоянный профиль гетерогенности продукта, оценка активности, эффективности и безопасности (включая иммуногенность) отдельных форм может не потребоваться.
Гетерогенность может также быть обусловлена производственными причинами и (или) хранением фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Поскольку гетерогенность таких препаратов определяет их качество, для обеспечения постоянства серий необходимо охарактеризовать степень и профиль такой гетерогенности. Если такие варианты целевого продукта обладают свойствами, сопоставимыми со свойствами самого целевого продукта по активности, эффективности и безопасности, эти варианты целевого продукта рассматривают в качестве родственных соединений. Если изменение процесса производства или продукты деградации приводят к появлению у продукта профилей гетерогенности, отличающихся от профиля гетерогенности для материала, использованного в доклинической и клинической разработке, необходимо изучить значимость таких изменений.
Аналитические методы, направленные на изучение физико-химических свойств, перечислены в подразделе 6.1 настоящей главы. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что постоянно разрабатываются новые аналитические технологии и модификации уже существующих технологий, которые следует использовать, если это обосновано.
В целях выпускающего контроля качества серий (как это указано в разделе 4 настоящей главы) необходимо отобрать надлежащий перечень этих методов аналитического исследования и обосновать его.
 

2.1.2. Биологическая активность

Оценка биологических свойств является не менее важным компонентом установления полного профиля свойств лекарственного препарата. Важным свойством лекарственного препарата является биологическая активность, которая определяет особую способность или свойство препарата оказывать определенный биологический эффект.
Производитель должен представить валидную биологическую методику количественного определения, позволяющую измерить биологическую активность. Примеры методик, используемых для определения биологической активности:
  • биологические методики количественного определения с использованием животных, которые определяют биологический ответ организма на препарат;
  • биологические методики количественного определения с использованием культур клеток, которые определяют биохимический или физиологический ответ на клеточном уровне;
  • биохимические методики количественного определения, которые определяют такие биологические активности, как скорость ферментативных реакций или биологические эффекты, обусловленные иммунологическими взаимодействиями.
Могут быть приемлемы и другие методики, такие как исследования лиганд-рецепторных взаимодействий.
Под активностью (potency) (выражаемой в единицах) понимается количественная мера биологической активности, основанная на показателе качества препарата, связанном с его значимыми биологическими свойствами, тогда как под количественным содержанием (quantity) (выражаемым в единицах массы) понимается физико-химическая мера содержания белка.
Не во всех случаях требуется воспроизводить биологическую активность в клинической ситуации. В ходе фармакодинамических и клинических исследований необходимо установить корреляцию между ожидаемым клиническим эффектом и активностью, рассчитанной с помощью биологической методики количественного определения.
Результаты количественного определения биологических методик следует выражать в единицах активности, откалиброванных по международному или национальному стандартному образцу (при их наличии и пригодности для использованной методики). Если такой стандартный образец отсутствует, необходимо приготовить собственный стандартный материал, а результаты испытания промышленных серий — выражать в разработанных единицах.
Физико-химические данные о сложных молекулах достаточно многообразны, тем не менее зачастую они не позволяют подтвердить структуру более высокого порядка, однако о ней можно косвенно судить по биологической активности. В таких случаях приемлема комбинация биологической методики с расширенными доверительными пределами и специальной количественной мерой. Следует отметить, что замена биологической методики количественного определения, измеряющей биологическую активность препарата, на физико-химические испытания допускается лишь при соблюдении 2 следующих условий:
  • с помощью таких физико-химических методов можно получить достаточно подробные физико-химические данные о продукте, включая сведения о структуре высокого порядка, при этом подтверждена соответствующая корреляция с биологической активностью;
  • у производителя лекарственного препарата имеется хорошо документированная история производства.
Если для расчета биологической активности, основанного на надлежащей корреляции, используются исключительно физико-химические испытания, их результаты следует выражать в единицах массы.
В целях выпускающего контроля качества серий (как это указано в подразделе 4 настоящей главы) производитель должен обосновать выбор соответствующей методики количественного определения (биологической и (или) физико-химической).
 

2.1.3. Иммунохимические свойства

Если целевым продуктом является антитело, необходимо всесторонне описать его иммунологические свойства. Для определения аффинности, авидности и иммунореактивности (включая перекрестную реактивность) следует (по возможности) использовать методики связывания антитела с очищенными антигенами и определенными участками антигенов. Кроме того, необходимо описать биохимические свойства молекулы-мишени, несущей соответствующий эпитоп, а также сам эпитоп (по возможности).
В некоторых случаях молекулу белка некоторых активных фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов необходимо изучить с помощью иммунохимических методик (например, ИФА, вестерн-блот), в которых используются антитела, распознающие различные эпитопы белковой молекулы. Иммунохимические свойства белка могут использоваться для установления его подлинности, постоянства свойств и чистоты или для количественного определения показателей качества.
Если оценка иммунохимических свойств используется в целях выпускающего контроля качества серий, необходимо представить все значимые сведения об антителе.
 

2.1.4. Чистота, примеси и контаминанты

2.1.4.1. Чистота
Установление абсолютной, равно как и относительной чистоты сопряжено со значительными аналитическими затруднениями, а результаты установления чистоты в значительной степени зависят от использованного метода. Традиционно относительную чистоту биологического препарата выражают с помощью специфической активности (в единицах биологической активности на миллиграмм препарата), которая также сильно зависит от использованного метода. Вследствие этого чистоту активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата изучают с помощью комбинации аналитических методик.
Ввиду уникальности биосинтетического процесса производства и молекулярных свойств биотехнологических и биологических препаратов активная фармацевтическая субстанция может состоять из нескольких молекулярных сущностей или вариантов. Если такие молекулярные сущности образуются в результате ожидаемых посттрансляционных модификаций, они являются частью целевого продукта. Если варианты целевого продукта образуются в ходе процесса производства и (или) хранения и обладают свойствами, сопоставимыми с целевым продуктом, их рассматривают в качестве родственных соединений, а не примесей (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.1 настоящей главы).
Следует установить отдельные критерии приемлемости для отдельных родственных соединений или критерии приемлемости для их суммы.
В целях выпускающего контроля качества серий (в соответствии с требованиями подраздела 4 настоящей главы) для определения чистоты необходимо отобрать и обосновать подходящий перечень методов.
2.1.4.2. Примеси
Помимо изучения чистоты активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, которые могут состоять из целевого продукта и множества родственных соединений, производитель также должен изучить примеси, которые могут в них содержаться. Примеси делятся на производственные и родственные. Они могут иметь изученную структуру, могут быть описанными частично или неидентифицированными. Если удается получить достаточное количество примесей, их необходимо как можно подробнее охарактеризовать и по возможности изучить их биологическую активность.
Производственные примеси образуются в ходе процесса производства, например, из клеточных субстратов (например, белки клетки-хозяина, ДНК клетки-хозяина), клеточной культуры (например, индукторы, антибиотики или компоненты питательной среды) или вследствие последующей переработки (в соответствии с требованиями подраздела 6.2.1 настоящей главы). Родственные примеси (например, прекурсоры, определенные продукты деградации) — это молекулярные варианты, образующиеся при производстве и хранении целевого продукта, которые не обладают активностью, эффективностью и безопасностью сопоставимыми с целевым продуктом.
Кроме того, критерии приемлемости по содержанию примесей в целевом продукте должны основываться на результатах анализа серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях, и серий, испытанных для подтверждения постоянства производства.
Следует установить отдельные критерии приемлемости для отдельных родственных примесей или критерии приемлемости для их суммы. В определенных случаях для некоторых примесей критерии приемлемости устанавливать не требуется (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы).
Примерный перечень аналитических методик, которые целесообразно использовать в испытаниях на примеси, приведен в подразделе 6.2 настоящей главы. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что непрерывно разрабатываются новые аналитические технологии и модификации ныне существующих аналитических технологий. При наличии достаточного обосновании их также следует использовать для контроля качества целевого продукта.
В целях выпускающего контроля качества серий (в соответствии с требованиями подраздела 4 настоящей главы) необходимо отобрать надлежащий перечень методов контроля качества и обосновать его.
2.1.4.3. Контаминанты
К контаминантам препарата относятся все посторонним образом привнесенные материалы, не используемые в процессе производства, например, химические и биохимические материалы (например, микробные протеазы) и (или) микроорганизмы. Необходимо избегать наличия контаминантов и (или) надлежащим образом контролировать их содержание с помощью надлежащих внутрипроизводственных критериев приемлемости или пределов действия в спецификациях на фармацевтическую субстанцию или лекарственный препарат (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы). При особых случаях контаминации посторонними вирусами или микоплазмой концепция пределов действия неприменима, поэтому необходимо следовать стратегиям, указанным в главах 1 и 2 настоящих Правил.
 

2.1.5. Количественное содержание

Количественная характеристика препарата, определяемая содержанием белка, имеет большое значение для биотехнологических и биологических препаратов и определяется с помощью соответствующих методов анализа (обычно физико-химических). В частных случаях допускается подтвердить, что установленные такими методами показатели качества могут быть непосредственно связаны с показателями, определенными в ходе биологического анализа. При наличии такой корреляции целесообразнее измерять количество, а не биологическую активность в ходе таких производственных процессов, как наполнение.
 

2.2. Аналитические вопросы

 

2.2.1. Стандартные образцы и стандартные материалы

При регистрации новых молекулярных соединений международные или национальные стандарты, как правило, будут отсутствовать. На момент подачи заявления о регистрации лекарственного препарата производитель должен разработать надлежащим образом охарактеризованный собственный основный стандартный материал, приготовленный из серий, отражающих свойства промышленного и клинического материалов. Собственные рабочие стандартные материалы, используемые для испытания промышленных серий, следует калибровать по основному стандартному материалу. При наличии международного или национального стандарта и его пригодности собственные стандартные материалы следует калибровать по нему. Хотя как в биологических методиках, так и физико-химических испытаниях рекомендуется использовать одинаковый стандартный материал, в некоторых случаях необходимо использовать различные стандартные материалы. Кроме того, могут потребоваться отдельные стандартные материалы для родственных соединений, родственные и производственные примеси. В соответствующих случаях в регистрационное досье необходимо включить описание производства и (или) очистки стандартных материалов. Необходимо также представить документацию по характеристикам, условиям хранения и составу стандартных материалов, обосновывающую стабильность стандартных материалов.
 

2.2.2. Валидация аналитических методик

При подаче заявления о регистрации лекарственного препарата в уполномоченные органы государств-членов заявители должны валидировать аналитические методики, использованные в спецификациях, в соответствии с требованиями актов, входящих в право Союза, за исключением отдельных методик, присущих исключительно испытаниям, используемым для анализа биотехнологических и биологических лекарственных препаратов.
 

2.3. Контроль производства

 

2.3.1. Особенности технологического процесса

Правильное планирование процесса производства и теоретический анализ его возможностей являются частью стратегии разработки контролируемого и воспроизводимого процесса производства, позволяющего получить активную фармацевтическую субстанцию и лекарственный препарат, отвечающие требованиям спецификации. В этом отношении пределы отклонений показателей качества обосновывают критическими данными, полученными на протяжении всего процесса производства (начиная с раннего этапа разработки и заканчивая промышленным производством).
Испытания активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата на определенные примеси могут не потребоваться (их допускается не включать в спецификации), если с помощью подходящих исследований подтверждены эффективный контроль их содержания или приемлемая степень очистки. Такие испытания могут включать верификацию промышленных серий в соответствии с требованиями, содержащимися в актах, входящих в право Союза. На момент регистрации в распоряжении заявителя могут находиться лишь ограниченные данные по верификации промышленных серий, поэтому данную концепцию в частных случаях допускается внедрять на пострегистрационном этапе в соответствии с требованиями, содержащимися в актах, входящих в право Союза.
 

2.3.2. Внутрипроизводственные критерии приемлемости и уровень действия

Внутрипроизводственные испытания проводятся на этапах принятия критических решений, а также на других этапах, если полученные результаты испытаний указывают на необходимость удостовериться в постоянстве процесса производства активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Результаты внутрипроизводственных испытаний регистрируют в виде пределов уровня действия или критериев приемлемости. Проведение таких испытаний позволяет исключить испытания фармацевтической субстанции или лекарственного препарата (в соответствии с требованиями подраздела 2.3.1 настоящей главы). Внутрипроизводственные испытания in vitro на посторонние агенты клеток предельного для производства клеточного возраста являются примером испытания, для которого необходимо установить критерии приемлемости.
Производитель также должен использовать собственные (внутренние) пределы уровня действия для оценки процесса на менее значимых этапах. Основой для разработки предварительных пределов уровня действия, устанавливаемых для процесса производства, должны служить данные, полученные в ходе разработки лекарственного препарата и проведения валидационных циклов. Такие пределы, ответственность за установление которых несет производитель, могут быть использованы для начала расследования возможных отклонений или дальнейших действий, направленных на их устранение. В дальнейшем эти пределы следует изучать и корректировать по мере приобретения дополнительного производственного опыта и данных после регистрации лекарственного препарата.
 

2.3.3. Спецификации на исходные материалы, сырье и вспомогательные вещества

Качество исходных материалов и сырья, использовавшегося в производстве фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, должно удовлетворять стандартам, соответствующим их целевому назначению. Исходные материалы и сырье (включая реактивы) биологического происхождения требуют тщательного изучения на предмет наличия или отсутствия опасных эндогенных и посторонних агентов. Методики, позволяющие использовать аффинную хроматографию (например, применение моноклональных антител), должны включать соответствующие меры, обеспечивающие отсутствие негативного влияния таких производственных примесей и потенциальных контаминантов, образующихся в ходе производства, на качество и безопасность фармацевтической субстанции и лекарственного препарата. Необходимо представить соответствующие сведения об использующихся антителах.
По возможности качество вспомогательных веществ, использующихся в производстве лекарственного препарата (и в некоторых случаях, фармацевтической субстанции), а также система «контейнер — укупорка» должны удовлетворять фармакопейным стандартам. Иначе, для нефармакопейных вспомогательных веществ, необходимо установить удовлетворительные критерии приемлемости.
 

2.4. Фармакопейные спецификации

 
Фармакопеи государств-членов и основные фармакопеи, в соответствии с Концепцией гармонизации фармакопей государств — членов Евразийского экономического союза, утвержденной Решением Коллегии Комиссии от 22 сентября 2015 г. N 119 (далее — фармакопеи) содержат в фармакопейных статьях (монографиях) важные требования в отношении определенных аналитических методик и критериев приемлемости, которые, если они применимы, являются частью процесса оценки фармацевтической субстанции либо лекарственного препарата. Такие фармакопейные статьи (монографии), применимые к биотехнологическим и биологическим препаратам, включают в том числе испытания на стерильность, эндотоксины, микробиологическую чистоту, объем продукта в контейнере, однородность дозирования и механические включения. С точки зрения использования фармакопейных методов и критериев приемлемости требования настоящей главы связаны с обеспечением определенной степени гармонизации аналитических методик между фармакопеями. Фармакопеи предназначены для разработки идентичных или методологически эквивалентных аналитических методик и критериев приемлемости.
 

2.5. Допустимые пределы на выпуск и допустимые пределы на срок годности

 
При обосновании показателей качества допускается использовать концепцию допустимых пределов на выпуск вместо допустимых пределов на срок годности. Эта концепция заключается в установлении допустимых пределов показателей качества активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, которые на момент их выпуска более строгие, чем на срок годности. Примерами применения концепции могут служить активность (potency) и продукты деградации. В частных случаях концепцию пределов на выпуск допускается применять исключительно в отношении собственных допустимых пределов, но не установленных в регистрационном досье допустимых пределов на срок годности.
 

2.6. Статистические концепции

 
При необходимости представления количественных данных следует проводить надлежащий статистический анализ. Необходимо всесторонне описать методы анализа, включая их обоснование и научные предпосылки выбора. Это описание должно быть достаточно полным (ясным), чтобы выполнить независимую обработку представленных результатов.
 

3. Обоснование спецификации

 
Составление спецификаций на фармацевтическую субстанцию и лекарственный препарат является частью общей стратегии контроля качества, включающей контроль качества исходных материалов, сырья и вспомогательных веществ, внутрипроизводственные испытания, оценку или валидацию процесса производства, соблюдение правил надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией, изучение стабильности и испытание постоянства свойств серий. В совокупности указанные элементы обеспечивают надлежащее качество лекарственного препарата. Поскольку спецификации предназначены в большей мере для подтверждения качества, а не для характеристики свойств лекарственного препарата и (или) активной фармацевтической субстанции, производитель должен представить предпосылки выбора и обоснование включения в спецификацию и (или) исключения из нее испытаний определенных показателей качества. При разработке научно обоснованных спецификаций необходимо учитывать ряд аспектов, указания по которым представлены ниже.
Спецификации должны быть связаны с процессом производства. Спецификации должны основываться на результатах анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства. Необходимо увязать спецификации и процесс производства, особенно по родственным соединениям, родственным и производственным примесям. Изменения процесса производства и продукты деградации, образующиеся при хранении, могут приводить к гетерогенным профилям, отличающимся от профилей у материала, использованного в доклинической и клинической разработке. Необходимо изучить значимость таких изменений.
Спецификации должны позволять провести оценку стабильности активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата. При разработке спецификаций необходимо учитывать деградацию (старение) активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, которая происходит при хранении. Ввиду присущей этим продуктам сложной структуры невозможно подобрать одну методику или один параметр, описывающие профиль стабильности. Вследствие этого производитель должен предложить в регистрационном досье профиль показателей стабильности. Результаты испытания такого профиля показателей стабильности должны в дальнейшем позволять обнаружить изменения качества лекарственного препарата и (или) активной фармацевтической субстанции. Перечень включаемых в спецификацию испытаний зависит от свойств лекарственного препарата. Производителю следует выполнять требования главы 8 настоящих Правил.
Спецификации должны быть связаны с доклиническими и клиническими исследованиями. Спецификации необходимо составлять, основываясь на результатах анализа серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях. Качество материала, производимого в промышленном масштабе, должно соответствовать качеству серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях.
Спецификации должны быть связаны с аналитическими методиками. Критические показатели качества включают, например, биологическую активность (potency), свойства и количество родственных соединений, родственных и производственных примесей. Указанные показатели изучают с помощью большого числа аналитических методик, каждая из которых характеризует различные свойства препарата. При разработке препарата нередко вместе с совершенствованием технологии производства препарата происходит совершенствование аналитической технологии. В связи с этим необходимо подтвердить, что данные, полученные в ходе разработки, коррелируют с данными, полученными на момент подачи заявления о регистрации лекарственного препарата.
 

4. Спецификации

 
Выбор испытаний, включаемых в спецификации, зависит от лекарственного препарата. Необходимо описать научные предпосылки, на основании которых был установлен допустимый диапазон критериев приемлемости. Критерии приемлемости следует устанавливать и обосновывать, руководствуясь результатами анализа серий, использованных в доклинических и (или) клинических исследованиях, результатами анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства, результатов исследований стабильности и релевантных данных по разработке лекарственного препарата.
В некоторых случаях допускается проводить испытания на промежуточных продуктах, а не фармацевтической субстанции или лекарственном препарате. В таких случаях результаты испытаний следует рассматривать в качестве внутрипроизводственных критериев приемлемости и включать их в спецификацию на фармацевтическую субстанцию или лекарственный препарат, если это предусмотрено требованиями уполномоченных органов государств-членов.
 

4.1. Спецификация на активную фармацевтическую субстанцию

 
Приведенные в настоящем подразделе главы испытания и критерии приемлемости, в целом, применимы ко всем активным фармацевтическим субстанциям (соответствующие аналитические методики указаны в подразделе 2.2.2 настоящей главы). В применимых случаях с активной фармацевтической субстанцией необходимо проводить фармакопейные испытания (например, определение эндотоксинов). В частных случаях могут потребоваться также дополнительные критерии приемлемости, специфичные для активной фармацевтической субстанции.
 

4.1.1. Внешний вид и описание

Необходимо дать качественное описание физического состояния (например, твердое, жидкое) и цвета активной фармацевтической субстанции.
 

4.1.2. Подлинность

Испытания на подлинность должны быть высоко специфичными в отношении фармацевтической субстанции и основываться на уникальных свойствах ее молекулярной структуры и (или) иных особенностях. Для установления подлинности может потребоваться проведение более одного испытания (физико-химического, биологического и (или) иммунохимического). Испытания могут носить качественный характер. В целях установления подлинности допускается использовать и (или) соответствующим образом модифицировать методы, традиционно используемые для установления свойств препарата и описанные в подразделах 2.1 и 6.1 настоящей главы.
 

4.1.3. Чистота и примеси

Абсолютную чистоту биотехнологических и биологических препаратов сложно установить, а результаты ее определения зависят от использованного метода (в соответствии с указаниями подраздела 2.1.4 настоящей главы). Вследствие этого чистоту фармацевтической субстанции, как правило, оценивают с помощью комбинации методов. При выборе и оптимизации аналитических методик следует стремиться к отделению целевого продукта от родственных соединений и примесей.
Примеси таких препаратов делятся на производственные и родственные:
  • к производственным примесям (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.4 настоящей главы) активной фармацевтической субстанции относятся питательные среды, белки и ДНК клетки-хозяина, моноклональные антитела, хроматографические среды, использованные при очистке, растворители и компоненты буферных растворов. Минимизировать содержание таких примесей необходимо путем выполнения надлежащего контроля производственных процессов;
  • родственные примеси (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.4 настоящей главы) активной фармацевтической субстанции — это молекулярные варианты, образующиеся при производстве и (или) хранении и отличающиеся от целевого продукта по своим свойствам.
При выборе и оптимизации аналитических методик испытания на примеси следует стремиться к отделению целевого продукта и родственных соединений от примесей. Необходимо разработать критерии приемлемости на отдельные примеси и (или) на сумму примесей. В частных случаях критерии приемлемости на некоторые примеси могут не потребоваться (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы).
 

4.1.4. Активность (potency)

В спецификации необходимо включить подходящую валидированную методику испытания на активность (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.2 настоящей главы) биотехнологических или биологических активных фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата. Если для испытания на подлинность лекарственного препарата (в соответствии с требованиями подраздела 4.2.4 настоящей главы) используется надлежащая методика, то для количественного определения активной фармацевтической субстанции может быть достаточным альтернативный метод (физико-химический и (или) биологический). В некоторых случаях дополнительную ценность могут представлять результаты определения специфической активности.
 

4.1.5. Количественное содержание (quantity)

Необходимо определить количественное содержание фармацевтической субстанции, основанное, как правило, на содержании (массе) белка, используя надлежащую методику. Определение количественного содержания может осуществляться без стандартного образца или материала. Если производство лекарственного препарата основывается на биологической активности, дополнительное определение количественного содержания в частных случаях не требуется.
 

4.2. Спецификация на лекарственный препарат

 
Следующие испытания и критерии приемлемости в целом применимы ко всем лекарственным препаратам. Каждый подраздел 4.2.1 — 4.2.5 настоящей главы по лекарственному препарату содержит перекрестные ссылки на подразделы 4.1.1 — 4.1.5 настоящей главы по активной фармацевтической субстанции. К соответствующим лекарственным формам применяются фармакопейные требования Союза и государств-членов. К стандартным испытаниям, указанным в фармакопеях, относятся в том числе стерильность, эндотоксины, микробиологическая чистота, извлекаемый объем, механические включения, однородность единиц дозирования, содержание воды (влаги) в лиофилизате. Если применимо, испытание на однородность единиц дозирования допускается проводить в качестве внутрипроизводственного контроля, устанавливая при этом соответствующие критерии приемлемости.
 

4.2.1. Внешний вид и описание

Необходимо привести качественное описание физического состояния (например, твердое, жидкое), цвета и прозрачности лекарственного препарата.
 

4.2.2. Подлинность

Испытания на подлинность должны быть высоко специфичными в отношении лекарственного препарата и основываться на уникальных свойствах его молекулярной структуры и (или) иных особенностях. По своей природе испытания на подлинность могут быть качественными. Несмотря на то что в большинстве случаев достаточно одного испытания, для установления подлинности некоторых препаратов необходимо провести несколько испытаний (физико-химических, биологических и (или) иммунохимических). В целях установления подлинности лекарственного препарата допускается использовать и (или) соответствующим образом модифицировать методы, традиционно используемые для описания свойств активной фармацевтической субстанции и указанные в подразделах 2.1 и 6.1 настоящей главы.
 

4.2.3. Чистота и примеси

При производстве и (или) хранении лекарственного препарата могут образовываться примеси или может увеличиваться их содержание. Примеси могут совпадать с примесями активной фармацевтической субстанции, то есть быть производственными, либо быть продуктами деградации, образующимися исключительно в лекарственном препарате при его приготовлении (формуляции) или хранении. Если качественное и количественное содержание примесей (то есть их относительные количества и (или) концентрации) совпадает с таковым у активной фармацевтической субстанции, включение в спецификацию дополнительных испытаний не требуются. Если известно, что примеси привносятся или образуются при производстве и (или) хранении лекарственного препарата, необходимо определить их содержание и установить критерии их приемлемости.
В целях определения изменений активной фармацевтической субстанции при производстве и (или) хранении лекарственного препарата критерии приемлемости и аналитические методики необходимо разрабатывать и обосновывать с учетом предыдущего опыта изучения лекарственного препарата.
При выборе и оптимизации аналитических методик определения примесей следует стремиться к отделению целевого продукта и родственных соединений от примесей, включая продукты деградации, и вспомогательных веществ.
 

4.2.4. Активность (potency)

В спецификации необходимо включить подходящую валидированную методику испытания на активность (как это указано в подразделе 2.1.2 настоящей главы) биотехнологических или биологических активной фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата. Если для испытания на подлинность активной фармацевтической субстанции используется надлежащая методика, то для количественного определения лекарственного препарата может быть достаточным альтернативный метод (физико-химический и (или) биологический). Однако необходимо представить обоснование такого выбора.
 

4.2.5. Количественное содержание (quantity)

Необходимо определить количественное содержание активной фармацевтической субстанции в лекарственном препарате, основанное, как правило, на содержании (массе) белка, используя надлежащую методику. Если производство лекарственного препарата основывается на биологической активности, дополнительное определение количественного содержания в частных случаях может не потребоваться.
 

4.2.6. Общие испытания

Зачастую для оценки функциональных свойств лекарственного препарата необходимо охарактеризовать его физические свойства и определить иные показатели качества лекарственного препарата. Примерами таких испытаний служат pH и осмолярность.
 

4.2.7. Дополнительное испытание уникальных лекарственных форм

Выпуск лекарственного препарата в определенных лекарственных формах может потребовать проведения дополнительных, связанных с видом такой лекарственной формы испытаний, неупомянутых выше.
 

5. Определения

 
Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:
  • «активная фармацевтическая субстанция (нерасфасованный материал)» — материал, который впоследствии смешивается со вспомогательными веществами для получения лекарственного препарата. Он может состоять из целевого продукта, родственных соединений и родственных и производственных примесей. Он также может содержать вспомогательные вещества, включая иные компоненты, например, буферные растворы;
  • «активность» — мера биологической активности, определяемая с помощью подходящей биологической методики количественного определения (также называемой методикой количественного определения активности (potency assay) или биометодикой (bioassay)), основанная на показателе качества продукта, который связан с релевантными биологическими свойствами;
  • «биологическая активность» — особая способность или свойство препарата оказывать определенный биологический эффект. Количественной мерой биологической активности является активность (potency);
  • «вспомогательное вещество» — компонент, преднамеренно добавляемый к активной фармацевтической субстанции, который в прибавляемых количествах не должен обладать фармакологическими свойствами;
  • «контаминанты» — любые привнесенные посторонние материалы (например, химические, биохимические или микробные), не предусмотренные процессом производства активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата;
  • «критерии приемлемости» — численные пределы, диапазоны и другие подходящие меры приемлемости результатов аналитических методик, которым должны удовлетворять активная фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства;
  • «лекарственный препарат (лекарственная форма, готовый препарат)» — разновидность фармацевтического продукта, который содержит активную фармацевтическую субстанцию, как правило, в комбинации со вспомогательными веществами;
  • «предел действий (предел, требующий принятия мер)» — собственное значение, используемое для оценки постоянства процесса производства на менее критических этапах;
  • «примесь» — любой компонент, содержащийся в активный фармацевтической субстанции или лекарственном препарате, не являющийся целевым продуктом, родственным соединением или вспомогательным веществом, включая буферные компоненты. Различают производственные и родственные примеси;
  • «продукты деградации» — молекулярные варианты, образующиеся вследствие изменений целевого продукта или родственных соединений со временем и (или) под воздействием, например, света, температуры, pH, влаги, или вследствие взаимодействия со вспомогательным веществом и (или) первичной системой «контейнер — укупорка». Такие изменения могут возникать при производстве и (или) хранении (например, дезаминирование, окисление, агрегация, протеолиз). Продукты деградации могут представлять собой родственные соединения либо родственные примеси;
  • «производственные примеси» — примеси, образующиеся в процессе производства. Они могут проистекать из клеточных субстратов (например, белки клетки-хозяина, ДНК клетки-хозяина), клеточной культуры (например, индукторы, антибиотики или компоненты питательной среды) или последующей обработки (например, реактивы для обработки или экстрагируемые (вымываемые) из колонки вещества);
  • «родственные примеси» — молекулярные варианты целевого продукта (например, прекурсоры, некоторые продукты деградации, образующиеся при производстве и (или) хранении), которые не обладают сопоставимыми с целевым продуктом активностью, эффективностью и безопасностью;
  • «родственные соединения» — молекулярные варианты целевого продукта, образующиеся при производстве и (или) хранении, обладающие активностью и не имеющие негативного влияния на безопасность и эффективность лекарственного препарата. Эти варианты обладают свойствами, сопоставимыми с целевым продуктом, и не рассматриваются в качестве примесей;
  • «собственный основной стандартный материал» — надлежащим образом охарактеризованный материал, приготовленный производителем из репрезентативных серий в целях проведения биологических методик или физико-химических испытаний последующих серий, по которому также калибруют собственный рабочий стандартный материал;
  • «собственный рабочий стандартный материал» — материал, приготовленный аналогично основному стандартному материалу и предназначенный исключительно для анализа и контроля отдельных показателей качества последующих серий. Во всех случаях его калибруют по собственному основному стандартному материалу;
  • «спецификация» — перечень испытаний, ссылок на аналитические методики и соответствующие критерии приемлемости, представляющие собой численные (количественные) пределы, диапазоны и прочие критерии для описанных испытаний. Она задает набор критериев, которым должны соответствовать фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства, чтобы считаться приемлемыми для использования по целевому назначению. «Соответствие спецификациям» — способность фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, подвергшихся испытаниям согласно описанным в спецификациях аналитическим методикам, удовлетворять перечисленным в них критериям приемлемости. Спецификации являются ключевыми стандартами качества, которые предлагаются и обосновываются производителем и утверждаются уполномоченным органом в качестве условий регистрации;
  • «целевой продукт» — 1) белок, обладающий ожидаемой структурой; 2) белок, ожидаемый на основании последовательности ДНК и предполагаемой посттрансляционной модификации (включая гликоформы) и на основании предлагаемой последующей обработки (после культивирования), направленной на получение активной (действующей) биологической молекулы.
 

6. Дополнение

 

6.1. Характеристика физико-химических свойств

 
Настоящее дополнение содержит указания по техническим подходам, которые позволяют охарактеризовать и подтвердить структуру целевого продукта, активной фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата и проанализировать их физико-химические свойства. Используемые подходы будут отличаться от препарата к препарату, во многих случаях потребуется придерживаться подходов, не включенных в настоящее дополнение. Непрерывно возникают новые аналитические технологии и модификации ныне существующих. При достаточном обосновании их также следует использовать.
 

6.1.1. Характеристика и подтверждение структуры

Аминокислотная последовательность. Необходимо, насколько это возможно, установить аминокислотную последовательность целевого продукта, используя подходы, подобно описанным в абзацах втором — пятом настоящего подраздела, и затем сравнить их с аминокислотной последовательностью, которая соответствует нуклеотидной последовательности гена целевого продукта.

Аминокислотный состав. Общий аминокислотный состав определяют, используя различные гидролитические и аналитические методики, и сравнивают с аминокислотной последовательностью, которая соответствует нуклеотидной последовательности гена целевого продукта. Во многих случаях анализ аминокислотного состава позволяет получить определенные ценные сведения о структуре пептидов и небольших белков, однако для больших белков эти данные менее точны. Во многих случаях результаты количественного аминокислотного анализа позволяют установить содержание белка.
Терминальные последовательности аминокислот. Анализ концевых аминокислот проводят для установления природы и однородности амино- и карбси-концевых аминокислот. Если целевой продукт является гетерогенным по концевым аминокислотам, с помощью соответствующей аналитической методики необходимо определить относительное содержание вариантных форм. Последовательность таких концевых аминокислот необходимо сравнить с последовательностью концевых аминокислот, соответствующей нуклеотидной последовательности гена целевого продукта.
Пептидная карта. Избирательная фрагментация препарата на отдельные пептиды осуществляется при помощи подходящих ферментов или химических соединений, а образующиеся пептидные фрагменты подвергаются анализу с помощью ВЭЖХ или иной подходящей аналитической методики. Используя такие методы, как анализ аминокислотного состава, N-концевое секвенирование или масс-спектрометрию, необходимо, насколько это возможно, идентифицировать пептидные фрагменты. Пептидное картирование активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата с помощью должным образом валидированной методики — это метод, часто использующийся для подтверждения структуры целевого продукта в целях выпускающего контроля качества серий.
Сульфгидрильные группы и дисульфидные мостики. Если согласно данным нуклеотидной последовательности гена целевого продукта предполагается наличие остатков цистеина, необходимо по возможности определить количество и положения всех свободных сульфгидрильных групп и (или) дисульфидных мостиков. С этой целью используют пептидное картирование (в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях), масс-спектрометрию или иные подходящие технологии.
Углеводная структура. Необходимо определить содержание углеводов в гликопротеинах (нейтральные сахара, аминосахара и сиаловые кислоты). Кроме того, необходимо по возможности проанализировать структуру углеводных цепей, олигосахаридный профиль (профиль ветвления) и участки гликозилирования полипептидной цепи.
 

6.1.2. Физико-химические свойства

Молекулярная масса или размер. Молекулярную массу или размер определяют с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом (в восстанавливающих и (или) невосстанавливающих условиях), масс-спектрометрии и прочих подходящих технологий.
Профиль изоформ. Определяют с помощью изоэлектрического фокусирования или иных подходящих технологий.
Коэффициент экстинкции или молярный коэффициент поглощения. Во многих случаях целесообразно определять коэффициент экстинкции или молярного поглощения целевого продукта при определенной длине волны в ультрафиолетовом (УФ) или видимом спектре (например, 280 нм). Коэффициент экстинкции определяют с помощью УФ-спектрофотометрии (спектрофотометрии) в видимом диапазоне раствора препарата, содержащего известное количество белка, рассчитанного с помощью таких методов, как анализ аминокислотного состава или определение содержания азота и т.д. Если для измерения содержания белка используется УФ-абсорбция, следует использовать коэффициент экстинкции этого препарата.
Электрофоретические профили. Электрофоретические профили, данные о подлинности, однородности и чистоте получают с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, изоэлектрического фокусирования, электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом, вестерн-блота, капиллярного электрофореза и прочих подходящих методов.
Профили жидкостной хроматографии. Профили жидкостной хроматографии, данные о подлинности, однородности и чистоте получают с помощью эксклюзионной хроматографии, обращенно-фазной жидкостной хроматографии, ионо-обменной жидкостной хроматографии, аффинной хроматографии и прочих подходящих методов.
Спектроскопические профили. Определяют спектры абсорбции в ультрафиолетовом и видимом диапазонах. Структуры высокого порядка изучают с помощью таких методов, как круговой дихроизм, ядерный магнитный резонанс (ЯМР) или другие подходящие технологии.
 

6.2. Дополнение по примесям

 
В настоящем подразделе указаны потенциальные примеси, их источники и примеры применимых аналитических подходов их обнаружения. Подобно характеристике физико-химических свойств, профиль примесей и использующиеся технические подходы отличаются от препарата к препарату; во многих случаях необходимо придерживаться подходов, не включенных в настоящее приложение. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что непрерывно возникают новые аналитические технологии и модификации ныне существующих. При достаточном обосновании их также следует использовать.
 

6.2.1. Производственные примеси и контаминанты

Образуются в ходе процесса производства (пункт 2.1.4 настоящей главы) и делятся на 3 основные категории: проистекающие из клеточного субстрата, клеточной культуры и вследствие последующей обработки.
К проистекающим из клеточного субстрата примесям относятся белки организма-хозяина, нуклеиновая кислота (геномная, векторная или вся ДНК клетки-хозяина), но ими не ограничиваются. Чувствительными к белкам клетки-хозяина методиками являются, например, иммунологические методы, способные обнаруживать широкий диапазон белковых примесей. Поликлональные антитела, используемые в иммунологическом методе, получают путем иммунизации животных препаратом клеток-продуцентов, не содержащих ген, кодирующий целевой продукт, препаратом партнеров гибридизации (фузии) и препаратом иных подходящих клеточных линий. Содержание ДНК клеток хозяина можно определить с помощью прямого анализа препарата (например, с помощью технологий гибридизации). Во избежание установления критериев приемлемости для этих примесей в некоторых случаях подтверждают удаление примесей, проистекающих из клеточного субстрата (например, нуклеиновых кислот и белков клетки-хозяина), для этого прибегают к исследованиям клиренса, которые могут включать в себя лабораторные эксперименты с добавлением таких примесей.
К проистекающим из клеточной культуры примесям относятся индукторы, антибиотики, сыворотка и прочие компоненты питательных сред, но ими не ограничиваются.
К примесям, образующимся при последующей обработке, относятся ферменты, химические и биологические реактивы для обработки (например, бромциан, гуанидин, окисляющие и восстанавливающие вещества), неорганические соли (например, тяжелые металлы, мышьяк, неметаллические ионы), растворители, носители, лиганды (например, моноклональные антитела) и прочие экстрагируемые вещества, но ими не ограничиваются.
Необходимо в соответствии с главой 2 настоящих Правил подтвердить способность процесса производства элиминировать и (или) инактивировать намеренно привнесенные, эндогенные и посторонние вирусы.
 

6.2.2. Родственные примеси, включая продукты деградации

Ниже представлены наиболее часто встречающиеся варианты целевого продукта и перечень соответствующих технологий их анализа. Указанные варианты могут потребовать значительных усилий для их выделения и характеристики их свойств с целью установления вида модификаций. Используя должным образом установленные критерии приемлемости, необходимо провести испытания и контролировать содержание продуктов деградации, в значительных количествах образующихся при производстве и (или) хранении:
  • усеченные формы. Гидролитические ферменты и химические вещества могут катализировать разрыв пептидных связей, что можно обнаружить с помощью ВЭЖХ или электрофореза в ПААГ с ДСН. В зависимости от свойств вариантов целевого продукта возможно использование пептидного картирования;
  • прочие модифицированные формы. Можно выявить дезаминированные, изомеризованные, с нарушенной дисульфидной связью, окисленные или измененные формы конъюгатов (гликозилирование, фосфорилирование) и охарактеризовать их с помощью хроматографических, электрофоретических и (или) других подходящих аналитических методов (например, высокоэффективной жидкостной хроматографии, капиллярного электрофореза, масс-спектроскопии, кругового дихроизма);
  • агрегаты. К агрегатам относятся димеры и полимеры целевого продукта. Их, как правило, не причисляют к целевому продукту и родственным соединениям и определяют их содержание с помощью подходящих аналитических методик (например, эксклюзионной хроматографии, капиллярного электрофореза).