Содержание
ФС.2.5.0053.15 Элеутерококка колючего корневища и корни
Собранные осенью, тщательно очищенные от земли, разрубленные на куски и высушенные корневища и корни дикорастущего кустарника элеутерококка колючего – Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.), сем. аралиевых – Araliaceae.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Элеутерококка колючего ФС.2.5.0053.15
корневища и корни
Еleutherococci senticosi
rhizomata et radices Взамен ФС 42-0191-06
Собранные осенью, тщательно очищенные от земли, разрубленные на куски и высушенные корневища и корни дикорастущего кустарника элеутерококка колючего – Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.), сем. аралиевых – Araliaceae.
ПОДЛИННОСТЬ
Внешние признаки. Цельное сырье. Куски корневищ и корней, цельные или расщепленные вдоль, длиной до 8 см, толщиной до 4 см, деревянистые, твердые, прямые или изогнутые, иногда разветвленные. Кора тонкая, плотно прилегает к древесине. Корневища с поверхности гладкие или слабо-продольно-морщинистые с пазушными почками и следами отмерших стеблей и обломанных корней. Поверхность корней более гладкая со светлыми поперечными бугорками. Излом длинноволокнистый, светло-желтого или бледно-коричневого цвета. Корневища с поверхности светло-коричневые, корни – более темные. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.
Измельченное сырье. Кусочки корневищ и корней различной формы, светло-желтого или кремового цвета с коричневыми вкраплениями, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 5 мм. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.
Порошок. Кусочки корневищ и корней различной формы, светло-желтого или кремового цвета с коричневыми вкраплениями, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.
Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении поперечного среза корневища или корня должна быть видна перидерма с многослойной коричневой пробкой, среди крупных клеток паренхимы коры, содержащих друзы оксалата кальция, расположены секреторные каналы, лубяные волокна и сердцевинные лучи. Сердцевинные лучи многорядные, как правило, шириной в 2 – 3 клетки, в древесине – прямые, в коре – извилистые. Клетки центральной части сердцевинных лучей, расположенных в коре, нередко содержат мелкие друзы оксалата кальция. Кора отделена от древесины слоем камбия. Древесина широкая, как правило, кольцесосудистая.
Секреторные каналы многочисленные, выстланы 4 – 5 эпителиальными клетками, просветы их заполнены коричневым или оранжево-коричневым содержимым. В корне каналы мелкие, диаметр каналов не меняется по всей ширине коры. В корневище каналы 2 типов: более крупные каналы располагаются на границе феллодермы и лубяной части коры, мелкие (как у корня) – находятся в лубяной части коры.
Лубяные волокна с толстыми одревесневшими стенками располагаются, как правило, группами.
В клетках паренхимы коры должны быть видны многочисленные друзы оксалата кальция; крахмальные зерна содержатся только в клетках паренхимы, окружающих секреторные каналы, и в клетках сердцевинных лучей (в отличие от других представителей семейства Аралиевых, у которых крахмальные зерна заполняют все клетки паренхимы коры).
Древесина состоит из крупных сосудов и склеренхимных волокон (либ-риформ). Клетки сердцевинных лучей, реже – либриформа, заполнены крахмальными зернами, могут быть видны капли эфирного масла.
Корневище, в отличие от корня, имеет сердцевину, состоящую из крупных неодревесневших паренхимных клеток.
Измельченное сырье и порошок. При рассмотрении давленого микропрепарата должны быть видны группы сетчатых сосудов с окаймленными порами, редко – фрагменты спиральных сосудов; многочисленные склеренхимные волокна с внутренними перегородками; фрагменты сердцевинных лучей в виде групп округлых клеток с утолщенными пористыми стенками; лубяные волокна с толстыми одревесневшими пористыми стенками; группы паренхимных клеток, содержащих друзы оксалата кальция; фрагменты коры с секреторными каналами в виде коричневых или желтовато-коричневых трубок; фрагменты пробки, состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками; часто в клетках либриформа и сердцевинных лучей видны капли эфирного масла.
Рисунок – Элеутерококка колючего корневища и корни.
1 – фрагмент поперечного среза корневища: a – многослойная пробка,
б – крупный секреторный канал на границе феллодермы и лубяной части коры, в – мелкий секреторный канал в лубяной части коры, г – извилистый сердцевинный луч, д – группы лубяных волокон, е– друзы оксалата кальция, ж – камбий, з – сосуды ксилемы (30×); 2 – фрагмент лубяной части коры поперечного среза корневища: a – сердцевинный луч, б – друзы оксалата кальция, в – мелкие секреторные каналы, г – группы лубяных волокон (200×); 3 – фрагмент продольно-тангентального среза древесины корневища: a – сетчатые сосуды с окаймленными порами, б – склеренхимные волокна (200×); 4 – фрагмент продольно-тангентального среза древесины корневища: a – сердцевинный луч, б – склеренхимные волокна (200×); 5 – давленый препарат: а – фрагмент пробки, состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками (200×); 6 – давленый препарат: а – паренхимные клетки с друзами оксалата кальция (200×); 7 – давленый препарат: а – группа склеренхимных волокон коры c утолщенными пористыми стенками (200×)
Определение основных групп биологически активных веществ
- Тонкослойная хроматография
Серная кислота раствор спиртовой 10 %,. К 90 мл спирта 96 % приливают 10 мл серной кислоты концентрированной. Срок годности раствора не более 30 сут.
Около 2,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл смеси спирт 96 % – вода (1 : 1 о/о) и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером 10 × 10 см наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора стандартного образца (СО) элеутерозида В (см. раздел «Количественное определение – «Элеутерозида В», раствор А). Пластинку с нанесенными пробами сушат при комнатной температуре в течение 5 мин, затем помещают в камеру (выложенную изнутри фильтровальной бумагой), предварительно насыщенную в течение 30 мин смесью растворителей хлороформ – метанол – вода (70:30:4), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей в вытяжном шкафу.
Пластинку обрабатывают серной кислоты раствором спиртовым 10 %, нагревают в сушильном шкафу при 100 – 105 °С в течение 2 – 3 мин и просматривают при дневном свете.
На хроматограмме раствора СО элеутерозида В должна обнаруживаться зона адсорбции серого или серого с фиолетовым оттенком цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться следующие зоны адсорбции (снизу вверх от линии старта): 2 ярко выраженные зоны темно-серого цвета; зона серо-коричневого цвета, зона серого или серого цвета с фиолетовым оттенком на уровне зоны на хроматограмме раствора СО элеутерозида В; допускается обнаружение дополнительных слабовыраженных зон адсорбции серого, серого с фиолетовым оттенком или коричневого цвета.
- Высокоэффективная жидкостная хроматография
Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора, полученного при количественном определении (см. раздел «Количественное определение – «Элеутерозида В»), должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме раствора СО элеутерозида В.
- В коническую колбу вместимостью 25 мл помещают 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, прибавляют 10 мл горячей воды, нагревают на плитке в течение 5 мин и фильтруют. К 1 мл полученного извлечения прибавляют несколько капель железа(III) хлорида раствора 1 %, появляется зелёное окрашивание (полифенольные соединения).
ИСПЫТАНИЯ
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок – не более 14 %.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок – не более 8 %.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок – не более 1 %.
Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, – не более 5 %. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, – не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, – не более 5 %. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, – не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, – не более 5 %.
Посторонние примеси
Остатки стеблей, в том числе отделенные при анализе. Цельное сырье – не более 1,5 %.
Потемневшие в изломе корневища и корни. Цельное сырье – не более 3 %.
Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 1 %.
Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье. порошок – не более 1 %.
Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В – не менее 0,3 %; элеутерозида В – не менее 0,03 %.
Элеутерозид В
Приготовление растворов.
Раствор СО элеутерозида В. Около 10,0 мг (точная навеска) СО элеутерозида В растворяют в спирте 96 % в мерной колбе вместимостью 50 мл, доводят объем раствора смесью спирт 96 % – вода (1:1, о/о) до метки и перемешивают (раствор A).
5,0 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью спирт 96 % – вода (1:1, о/о) до метки и перемешивают (раствор В).
Срок годности растворов не более 3 мес при хранении в плотно укупоренной трае в прохладном, защищенном от света месте.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
– фактор асимметрии пика элеутерозида В должен находиться в пределах от 0,8 до 1,5;
– эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 5000 теоретических тарелок.
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 2,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл смеси спирт 96 % – вода (1:1) и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечение осторожно (без перемешивания) фильтруют через ватный тампон средней плотности, избегая попадания частиц на вату, в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение повторяют дважды, используя каждый раз 25 мл смеси спирт 96 % – вода (1:1), при этом ватный тампон для фильтрования не меняют. Объем извлечения в мерной колбе доводят смесью спирт 96 % – вода (1:1, о/о) до метки, одновременно промывая остаток сырья в колбе, и перемешивают.
Около 2 – 3 мл полученного извлечения фильтруют через нейлоновый фильтр (с размером пор 0,45 мкм), отбрасывая первые 1 – 2 мл фильтрата (испытуемый раствор).
Условия хроматографирования
| Колонка | нержавеющая сталь, 250 × 4,6 мм, эндкеппированный октадецилсилилсиликагель (С18) для хроматографии (5 мкм) | |
| Предколонка | соответствует используемой колонке, эндкеппированный октадецилсилилсиликагель (С18) для хроматографии (5 мкм) | |
| Подвижная фаза | А – раствор фосфорной кислоты концентрированной в воде (0,5:99,5);
Смешивают фосфорную кислоту концентрированную с водой для хроматографии в объемном соотношении (0,5:99,5). Приготовленный раствор фильтруют под вакуумом через мембранный фильтр с порами размером не более 0,45 мкм. В – ацетонитрил для хроматографии. |
|
| Способ
элюирования |
Программа градиента | |
| Время, мин | А, об. % | В, об. % |
| 0 – 5 | 90 | 10 |
| 5 – 27 | 90→80 | 10→20 |
| 27 – 30 | 80→50 | 20→50 |
| 30 – 35 | 50 | 50 |
| 35 – 40 | 50→90 | 50→10 |
| 40 – 45 | 90 | 10 |
| Скорость потока, мл/мин | 1 | |
| Температура
Колонки, оС |
20 ± 2 | |
| Детектор | УФ-спектрофотометрический или диодная матрица | |
| Длина волны, нм | 266 | |
| Объем вводимой
Пробы, мкл |
10 | |
| Время регистрации
Хроматограммы, мин |
30 | |
Хроматографируют попеременно испытуемый раствор и раствор СО, получая не менее 3 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Расчет содержания элеутерозида В проводят методом внешнего стандарта.
Содержание элеутерозида В в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где
S – площадь пика элеутерозида В на хроматограмме испытуемого раствора;
Sо – площадь пика элеутерозида В на хроматограмме раствора СО элеутерозида В;
а – навеска сырья, мг;
aо – навеска СО элеутерозида В, мг;
P – содержание основного вещества в СО элеутерозида В, %;
W – влажность сырья, %.
Сумма элеутерозидов
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл и проводят фракционное извлечение последовательно 2 раза спиртом 70 % и 2 раза спиртом 96 % порциями по 20 мл. Каждое извлечение проводят на магнитной мешалке при нагревании до температуры не выше 50 °С в течение 1 ч. Извлечения фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу вместимостью 100 мл и отгоняют спирт на роторном испарителе под вакуумом досуха. К сухому остатку в колбе прибавляют 10 мл воды и 10 мл углерода тетрахлорида. Содержимое колбы тщательно перемешивают и количественно переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл. Колбу дважды промывают углерода тетрахлоридом порциями по 5 мл и смывы присоединяют к содержимому в делительной воронке. Затем в колбу прибавляют 10 мл смеси хлороформ – спирт 96 % (5:1), перемешивают и оставляют на 10 мин.
В делительной воронке проводят очистку водной фазы трехкратным извлечением углерода тетрахлоридом порциями по 10 мл, отбрасывая каждый раз слой углерода тетрахлорида. К очищенной водной фазе в делительной воронке прибавляют 20 мл смеси хлороформ – спирт 96 % (5:1) (из них 10 мл из колбы для отгона) и извлекают элеутерозиды в течение 5 мин. Нижний слой фильтруют через бумажный фильтр, содержащий 2,0 г натрия сульфата безводного, в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение элеутерозидов в делительной воронке повторяют еще 4 раза той же смесью последовательно порциями 15, 15, 10 и 10 мл, собирая извлечения в ту же мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят смесью хлороформ – спирт 96 % (5:1) до метки и перемешивают (раствор А).
20,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора смесью хлороформ – спирт 96 % (5:1) до метки и перемешивают (раствор Б).
Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре в при длине волны 278 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь хлороформ – спирт 96 % (5:1).
Содержание суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где A – оптическая плотность испытуемого раствора Б;
– удельный показатель поглощения элеутерозида В при длине волны 278 нм, равный 302;
1,42 – коэффициент пересчета на сумму элеутерозидов;
a – навеска сырья, г;
W – влажность сырья, %.
Примечание. Определение суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В проводят для сырья, предназначенного для производства экстрактов.
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Скачать в PDF ФС.2.5.0053.15 Элеутерококка колючего корневища и корни